基础研究
方志凯, 金辉, 杨姗, 蒋男, 张茗宇, 周爽, 李畅, 李丽丽
目的 探讨FK506结合蛋白10(FK506 binding protein 10,FKBP10)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达和功能作用,为OSCC的预后判断和靶向治疗提供依据。方法 在癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库中选择OSCC样本284例,正常样本19例,并进行mRNA表达分析和诊断分析。在基因表达图谱交互分析网站上进行FKBP10与癌症预后的生存分析。通过实时荧光定量PCR和Western Blot检测4种OSCC细胞系及SAS和SCC9细胞转染siRNA后FKBP10的mRNA和蛋白表达情况。通过CCK8法检测FKBP10沉默后的细胞增殖能力,同时使用流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡。通过伤口愈合实验和侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力。通过蛋白组学和Western Blot分析FKBP10沉默后的总蛋白和磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)-丝氨酸/苏氨酸激酶(protein kinase B,AKT)的表达变化。结果 根据基因表达量分析结果显示,FKBP10的mRNA表达水平在OSCC中的表达显著高于正常组织(P < 0.001)。在诊断方面,FKBP10的表达量对OSCC具有一定的诊断价值(P < 0.05)。FKBP10与OSCC的生存分析表明,FKBP10的高表达导致患者生存期下降与预后不良(P < 0.05)。OSCC细胞系中FKBP10的mRNA和蛋白表达高于正常口腔角质形成细胞(P < 0.001)。沉默FKBP10可降低SAS和SCC9细胞的增殖、侵袭和迁移能力(P < 0.001),细胞周期被阻滞在G0/G1期(P < 0.001),凋亡显著上升(P < 0.05)。蛋白质质谱分析及Western Blot显示,FKBP10沉默显著下调Ras相关蛋白1(ras-related protein,RAP1)信号通路中以RAP鸟嘌呤核苷酸交换因子1(rap guanine nucleotide exchange factor 1, RAPGEF1)为主的多种蛋白的表达(P < 0.05)和PI3K-AKT蛋白的磷酸化(P < 0.05)。结论 FKBP10在OSCC中高表达,导致患者预后不良。FKBP10表达下调可通过RAP1-PI3K-AKT轴抑制OSCC细胞的增殖、迁移和侵袭,阻碍细胞周期进程并促进凋亡。FKBP10是OSCC的潜在治疗靶点和预后生物标志物。