基础研究
何康萍, 陈晓华, 李金儒, 詹英, 何峰, 蒋天鹭, 李菲菲, 于世宾
目的 探究脱落多配体蛋白聚糖-4(sSDC4)在大鼠颞下颌关节骨关节炎(TMJOA)中的作用机制,以期为TMJOA的防治提供实验依据。方法 本实验已获得单位实验动物伦理委员会批准。将12只6周龄雌性SD大鼠随机分为2组,分别于双侧颞下颌关节上腔注射50 μL浓度为4 mg/mL碘乙酸钠(MIA)(TMJOA模型组)和50 μL PBS(对照组)。4周后,取颞下颌关节髁突软骨,用苏木精-伊红(HE)染色、番红O-固绿(SO)染色及Ⅱ型胶原(Col-Ⅱ)免疫组化染色观察髁突软骨退变程度;取颞下颌关节滑膜用免疫组化染色检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达以评估滑膜炎症程度;并收集颞下颌关节腔滑液通过酶联免疫吸附法(ELISA)测定sSDC4水平。另外将12只6周龄雌性SD大鼠随机分为His-SDC4组和对照组,每3 d分别于双侧颞下颌关节上腔处注射50μL 100 ng/mL His-SDC4蛋白和50 μL PBS,共28 d,同以上实验取材进行HE、SO染色以及免疫组化染色(Col-Ⅱ、IL-6、TNF-α)观察髁突软骨退变以及检测滑膜炎症程度。体外培养SD大鼠滑膜成纤维细胞和髁突软骨细胞,随机分为His-SDC4刺激(10 ng/mL)组和对照组,进行CCK-8细胞毒性检测和光学显微镜下观察细胞形态学特点,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测IL-6、TNF-α的mRNA表达水平变化,ELISA检测细胞培养上清中IL-6、TNF-α的含量变化。结果 与对照组相比,TMJOA组髁突软骨厚度、SO阳性面积百分比、Col-Ⅱ阳性面积百分比降低(均P<0.001);滑膜炎评分升高(P<0.001),滑膜IL-6、TNF-α阳性细胞率升高(均P<0.001);滑液中sSDC4水平显著升高(P=0.011)。关节腔注射His-SDC4后,髁突软骨厚度、SO阳性面积百分比和Col-Ⅱ阳性面积百分比降低(均P<0.001);滑膜炎评分升高(P=0.006),滑膜IL-6、TNF-α阳性细胞率升高(均P<0.001)。体外细胞实验显示,His-SDC4刺激可显著上调滑膜成纤维细胞和髁突软骨细胞中IL-6和TNF-α的表达水平(均P<0.01),同时培养上清中这两种细胞因子的含量也显著增加(均P<0.01)。结论 TMJOA进程中滑液中的sSDC4水平显著升高,滑液中的sSDC4可以直接刺激滑膜成纤维细胞和髁突软骨细胞分泌更多的促炎因子,形成恶性循环加速TMJOA进程。