基础研究
黄茵茵, 梁栋梁, 邹耀堃, 韩景如, 葛青, 刘雪妍, 郭亚东, 黄新丽, 杨岚
目的 研究血清淀粉样P物质(serum amyloid P component,SAP)缓解小鼠牙周炎的机理,为确立SAP作为治疗牙周炎的新药物提供实验依据。方法 获得单位实验动物伦理委员会批准,建立野生型(wild type,WT)小鼠、SAP转基因(SAP -transgenic,SAP-Tg)小鼠的牙周炎模型,将小鼠分为WT对照组(WT组)、WT牙周炎组(W+P组)、SAP-Tg对照组(Tg组)和SAP-Tg牙周炎组(Tg+P组)。7 d后处死,取材(牙周组织、牙齿和牙槽骨)。酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组牙周组织中SAP蛋白表达,Micro-CT检测和HE染色检测分析牙槽骨吸收情况(釉牙骨质界到牙槽嵴顶的距离),抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色观察破骨细胞数量,免疫组化(immunohistochemistry,IHC)染色观察巨噬细胞数量,qRT-PCR检测各组牙周组织炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1beta,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达水平;16S核糖体核糖核酸(16S ribosomal ribonucleic acid,16S rRNA)基因测序技术进行口腔微生物测序。提取WT小鼠、SAP-Tg小鼠的巨噬细胞建立体外炎症模型,分为WT+LPS组和Tg+LPS组,qRT-PCR检测2组巨噬细胞极化相关基因诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、CD86、CD163、CD206的表达,破骨细胞分化诱导后进行TRAP染色。结果 ELISA结果显示,相较于WT+P组小鼠,Tg+P组牙周组织中具有更高水平的SAP表达;Micro-CT和HE染色结果显示,相较于WT+P组小鼠,Tg+P组小鼠的牙槽骨吸收减少,釉牙骨质界到牙槽嵴顶的距离缩短;TRAP染色结果显示,相较于WT+P组,Tg+P组破骨细胞数量减少;IHC染色和qRT-PCR结果显示,相较于WT+P组,Tg+P组牙周组织中巨噬细胞聚集明显减少,炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α表达下降。口腔微生物测序结果显示,WT+P组和Tg+P组小鼠牙周炎相关致病菌无明显差异。体外实验结果显示,相较于WT+LPS组,Tg+LPS组的M1型巨噬细胞标志物iNOS和CD86表达下调,M2型巨噬细胞标志物CD163和CD206均表达上调;TRAP染色结果显示,与WT+LPS组相比,Tg+LPS组破骨细胞数量减少。结论 牙周炎时,SAP过表达能有效缓解小鼠牙周炎的严重程度,抑制巨噬细胞向M1型极化,并且减少相关炎症因子表达,减少向破骨细胞分化,从而减缓牙槽骨的吸收。